乙肝表面抗原的

ELISA

法定量分析

方法學驗證

姓名

                Z  P          

學號

             0925400072         

班級

         09

級醫學檢驗本科二班

指導老師

沈

富

兵

二〇一三年四月

乙肝表面抗原定量測定的方法學驗證

作者：

ZP

（成都醫學院檢驗醫學院

09

級醫學檢驗本科二班，

610500

）

【摘要】

目的

用福州藍圖生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原

ELISA

法定量分析試劑盒對乙肝表面

抗原定量測定的方法進行驗證，以判斷是否能用于教學以及臨床分析。

方法

運用

ELLISA

法定量測定乙

肝表面抗原，應用試劑盒

HBsAg

標準從濃度為

8ng/ml

的

2

倍稀釋的

6

個濃度梯度，根據

OD

值繪制標準

曲線再計算相對回收率和板內和板間精密度，

通過資料數據綜合分析。

結果

HBsAg

線性較好，

其準確度、

精密度、

LOD

值均在正常范內。

結論

ELISA

法定量檢測

HBsAg

能較準確、快速地反映體內乙肝病毒復

制情況，可以用于教學以及臨床分析。

【關鍵詞】

乙肝表面抗原

方法學驗證

標準曲線

精密度

ELLISA

病毒性肝炎中乙型肝炎的危害較大，我國是病毒性乙型肝炎的高發流行區，

普通人群的乙型肝炎病毒

(hepatitis 

B 

virus

，

HBV)

感染率接近

60

％，約占世界

HBV

攜帶者的

1/3

。

乙型肝炎病毒的病原體不僅具有傳染性，

還可能導致發展成肝

硬化，甚至肝癌，所以乙型肝炎病毒的早期、準確、定量檢測對乙型肝炎臨床診

斷、療效觀察及預防具有重要的意義。酶免分析法

HBV

—

EIA

是

HBV

抗原和抗體最

常用的檢測技術，其方法簡便、價廉，適合一般實驗室推廣，其中酶聯免疫吸附

技術

(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)

目前應用最為廣泛，它常用

聚苯乙烯為固相載體，

使其與待測標本中的相應抗體或抗原結合，

然后加酶標記

的抗原或抗體，

再加底物顯色，

最后根據色澤深淺來推算待測抗原或抗體的含量。

此方法特異性高，有效測定范圍可達到

20500 ng/ml

，且酶免疫法有標記的試劑

比較穩定并且無放射線危害等優點。

我們采用對已知抗體濃度的樣品進行

ELISA

的定量檢測，通過對其數據的分

析來驗證

ELISA

法最乙肝表面抗原定量檢測的準確性和可靠性，

以衡量其實用性。

1 

材料與方法

1.1 

材料

1.1.1 

試劑盒

乙肝表面抗原

ELISA

法定量分析試劑盒，福州藍圖生物工程有限公司出品。

1.1.2 

儀器及酶標板

酶標儀：

Bio-Rad 680

；洗板機：

Bio-Rad 1575

；超純水系統：

Millipore Elix

；

電熱恒溫培養箱

(DNP-9052):

上海精宏實驗設備有限公司。

1.1.3 

溶液配制

⑴

0.01M pH7.4

的

PBS

緩沖液：

稱取

8g NaCl

、

0.2g KCl

、

1.44g Na2HPO4

和

0.24g KH2PO4, 

溶于

800ml

蒸

餾水中，用

HCl

調節溶液的

pH

值至

7.4

，最后加蒸餾水定容至

1L

即可。

⑵質控品：

用

PBS

緩沖液將標準品配制成

6

、

3

、

1.5ng/ml

三個質控品，每質控品

1ml

。