三種方法檢測乙肝表面抗原結果的比較
摘要】目的：通過乙肝表面抗原，比較三種方法學的優缺點。方法：采用化學
發光法檢測乙肝，然后對陽性標本分別用酶聯免疫吸附試驗和金標方法復檢。結
果：總數為
13207
份標本，化學發光方法檢測表面抗原陽性的標本為
1524
份，
ELISA
方法復檢后陽性標本數為
1415
，金標方法復檢后陽性標本數為
1241
。結論：
靈敏度化學發光方法最高、
ELISA
方法居中、金標方法最差；操作金標方法最簡
單、
ELISA
居中、化學發光方法稍難；金標方法假陰性假陽性率最高。因此，金
標方法只能進行篩檢，陽性或陰性都不能定診。
【關鍵詞】乙肝表面抗原；化學發光法；
ELISA
；金標法
【中圖分類號】
R156.3
【文獻標識碼】
B
【文章編號】
1005-0515(2011)12-0156-01
中國是乙型病毒肝炎的高發國家
,
根據流行病學調查
,
人群發生率較高
,
表面抗
原攜帶率約為
15%
［
1
］
。乙肝的實驗診斷對于其治療及預防有重要參考意義。
乙型肝炎病毒表面抗原
(HBsAg)
是由
Dane
顆粒的外殼和直徑
22 nm
的球型顆粒和
管型顆粒所組成［
1
］。
HBsAg
是
HBV
感染后第一個出現的血清學標志物
,
也是診
斷的重要指標之一。
HBsAg
陽性見于急性肝炎、慢性肝炎或無癥狀攜帶者。值得
注意的是在急性感染的恢復期
,
存在核心窗口期現象
,
即該時期
HBsAg
消失
,
抗
- HBs
還未出現的
,
此期可短至數天或長達數月。
目前檢測乙肝有三種比較常用的方法學，即酶聯免疫吸附試驗
(ELISA)
、金標
法、化學發光法。中國大多數臨床實驗室都采用酶聯免疫吸附試驗
(ELISA)
法來檢
測
HBsAg
。但對于
HBsAg
低濃度的標本
,
檢測時常因方法學的原因造成靈敏度較低
,
導致臨床出現漏檢
,
給病人帶來損失
,
尤其是需要臨床輸血的病人。；金標法
(Goldimmnnochromatography
，
GICA)
是在
ELISA
基礎上發展起來的一種檢測技術，
由于其具有操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設備等優點，也
廣泛應用于
HBsAg
的初篩；缺點式是此種方法靈敏度比
ELISA
更低，而且假陽性
率、假陰性率都很高。近年來發展起來的化學發光微粒子免疫分析法
(CMIA)
是靈
敏度非常高的方法。解決了低濃度
HBsAg
的檢測問題?，F將三種種方法對乙肝表
面抗原的檢測作一比較。
1
資料和方法
1.1
標本來源：收集牡丹江醫學院紅旗醫院檢驗科免疫室
2010
年全年常規做
乙肝
“
二對半
”
標本
13207
份，用半自動化學發光方法篩出乙肝表面抗原陽性的標
本
1515
份進行復檢，并通過金標法和酶聯方法進行比較。
1.2
方法：半自動化學發光方法原理：采用酶促化學發光，雙抗體夾心方法，用
辣根過氧化物酶作為標記酶，催化魯米諾發光，并在化學發光儀上讀出發光值并
計算含量，此種方法為定量方法。
金標方法原理：試劑條以膠體金為指示標記包被特異的抗體
,
應用免疫層析雙
抗體夾心原理檢測樣本中的乙肝表面抗原酶聯免疫吸附試驗
(ELISA)
法原理：采用
雙抗體夾心方法，用辣根過氧化物酶作為標記酶，催化
TMB
和過氧化氫產生有色
物質，加入酸性終止液后用酶標儀讀取光密度值進行計算并判斷陰陽性，此種方
法未定性方法。
2
試劑與儀器
半自動化學發光儀器為
GloRunner
型半自動化學發光儀，配套試劑為北京科
美化學發光試劑。金標試劑為廣州萬孚乙肝二對半金標板。
ELISA
試劑為上?？?/p>
華試劑，酶標儀為
Bio-Tek ELX800
，洗板機為
ELx50
洗板機。
3
檢測
所有標本先由半自動化學發光儀進行表面抗原檢測，陽性標本再用
ELISA
和
金表方法進行檢測。所有檢測嚴格按照標準
SOP
操作文件進行操作，質控品由黑
龍江省臨檢中心提供。
4
結果
總數為
13207
份標本，半自動化學發光方法表面抗原陽性的標本為
1524
份，
ELISA
方法復檢后陽性標本數為
1415
，金標方法復檢后陽性標本數為
1241
。
5
討論
從以上結果來看，半自動化學發光法陽性率最高，
ELISA
方法較化學發光法陽
性率低，金標方法陽性率最低?；瘜W發光方法要比
ELISA
方法敏感，化學發光方
法檢測弱陽性標本用
ELISA
方法檢測呈現陰性，同樣
ELISA
方法檢測弱陽性的標本
用金標方法同樣也呈現陰性。
ELISA
方法是國內主要檢測乙肝的方法，是一種操
作步驟比較簡單，靈敏度表較高的方法，所用儀器酶標儀的價格也不是很高，甚
至目測也可以報結果。金標法操作最為簡單，不需要任何儀器，很適合快速的篩
檢，但是此種方法的缺點也很明顯，檢測的靈敏度不高，存在一定假陽性率的問
題，金標方法檢測的結果，陰形可能存在假陰性，陽性也需要進行復檢。在實際
工作中，曾經有過金標表面抗原強陽性，但是經過化學發光和酶聯免疫方法測定，
變為陰性。因此金標方法檢測的結果不能作為定診的依據，必須經過其他的方法
進行驗證，只能作為乙肝的篩檢，其結果還必須進行確認?；瘜W發光法是近年發
展比較快的檢測方法學，我們所用的半自動化學發光方法采用的是酶促化學發光
法，其基本的檢測操作與
ELISA
方法一致，只有最后進行檢測的時候加入的酶促
底物不一樣，
ELISA
加入的是
TMB
和雙氧水，而酶促化學發光加入的是魯米諾和
雙氧水。
ELISA
用酶標儀檢測或根據檢測孔的顏色進行目測判斷結果；而酶促化
學發光方法必須用化學發光儀進行定性或定量分析檢測?；瘜W發光方法檢測靈敏
度要高于
ELISA
，對于
ELISA
方法檢測弱陽性的標本可以用化學發光方法進行復檢
并且進行定診。酶促化學發光方法與
ELISA
方法操作步驟相當，敏感度卻高很多。
缺點是酶促化學發光方法檢測必須依靠機器，不可以用肉眼觀察結果。另外，加
入酶促底物后，發光值會隨著時間的延長而進行性衰減，因此化學發光法進行讀
取數據時必須在規定的時間內讀取。經過我們監測發現，化學發光讀取發光值時
即使在規定的讀取時間內，每隔
1
分鐘檢測一次發光值，同一孔在不同的時間點
上的發光只相差很多，因此化學發光對于發光值的讀取最好在加入底物后同一時
間進行讀取，這一點對于定量檢測比較好。
參考文獻
［
1
］化學發光微粒子免疫分析法與酶聯免疫法測定乙肝表面抗原的比較
［
2
］劉秀琴
,
傅杭州
,
張曉俐
《海南醫學》
2010
年第
21
卷第
8
期